Identificación de biomarcadores asociados con la infección de Mycobacterium bovis y la respuesta inmunológica protectora a la tuberculosis en alpacas

Abstract

La tuberculosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa que afecta una amplia gama de hospederos en los que se encuentra la alpaca. El objetivo de este estudio fue evaluar las características inmunológicas de la tuberculosis latente, utilizando como herramienta diagnóstica una técnica de inmunoensayo (ELISA) para medición de la citoquina interferón gamma (INF-γ), secretada por los leucocitos sensibilizados durante un periodo de cultivo de 24 horas con antígenos específicos (ESAT-6 y CFP10) al Mycobacterium tuberculosis complex. Adicionalmente se evaluó la proteína PPD (derivado proteico purificado) que se emplea en la prueba de reacción cutánea, así como también la utilidad de la secuencia de inserción IS6110 del complejo Mycobacterium tuberculosis y una PCR anidado dirigida contra el gen de la proteína MPB70 de Mycobacterium bovis. Se evaluaron un total de 52 alpacas entre sanas y enfermas sin antecedentes de tuberculosis, provenientes del Fundo Huaycuyo-Puno. Los resultados mostraron que un 98.1 % (51/52) de las alpacas dieron resultados negativos al ensayo de IFN-γ, y 1.9 % (1/52) dio resultado indeterminado. Así mismo, no hubo amplificación por PCR al segmento IS6110, ni al MPB70. Sin embargo, en 9 alpacas evaluadas con antígenos específicos de Mycobacterium tuberculosis se encontró una secreción de INF-γ en 22 % con ESAT-6,44 % con CFP-10 y 44 % usando el PPD. Estos resultados son una primera aproximación cuantitativa del IFN-γ en los linfocitos de las alpacas ubicadas a 3925 msnm después de una exposición antigénica. Sin embargo no podemos concluir cual sería el mejor antígeno inmunodominante en alpacas, debido a un bajo número de muestras evaluadas.

Bovine tuberculosis is an infectious disease that affects a wide range of host in which there is the alpaca. The objective of this study was to evaluate the immunological characteristics of latent tuberculosis, as a diagnostic tool using an ELISA assay, based on detection of interferon-gamma cytokine (INF-γ), secreted by leukocytes sensitized for a 24 hours culture period with specific antigens (ESAT-6 and CFP10) which are specific for Mycobacterium tuberculosis complex. Additionally, we evaluated the PPD (purified protein derivative) used in the skin test, the utility of the insertion sequence IS6110 from M. tuberculosis complex and the nested PCR directed against the gene for the MPB70 protein of Mycobacterium bovis. We evaluated a total of 52 sick and healthy alpacas with no history of tuberculosis, from the Fundo Huaycuyo-Puno. The results showed that 98.1% (51/52) were negative to the IFN-γ responses, and 1.9 % (1/52) was an indeterminate results. Likewise, there was no PCR amplification segment IS6110, either the MPB70. However, after specific Mycobacterium tuberculosis antigen evaluation we found INF-γ response in 9 alpacas, 22 %, 44 % and 44% in ESAT-6, CFP10 and PPD stimulation respectively. These results are a first quantitative approach of IFN-γ in lymphocytes of alpacas located at 3925 m after antigen exposure. Futures studies including larges samples should be considered to make conclusions.