Estandarización de un protocolo de extracción de ADN en pieles del Pecari de collar silvestre (Pecari tajacu Linnaeus 1758)

Abstract

La Ley Forestal y de Fauna Silvestre en el Perú, permite la caza de subsistencia de la fauna silvestre para autoconsumo y el comercio de pieles por las comunidades locales. Estas pieles son secadas en la modalidad de seco dulce y luego almacenadas en las viviendas de los pobladores hasta su comercialización. Por lo tanto, son altamente manipuladas y expuestas a efectos ambientales diversos. En el estudio se recolectó 300 muestras de pieles, procedentes de tres cuencas de ríos (Amazonas, Napo y Pacaya- Samiria) y se estandarizó un protocolo de extracción del ADN para pieles de Pecari, evaluándose dos métodos de extracción de ADN (Fenol– Cloroformo – Alcohol isoamilico y por columna). Se logró cuantificar el ADN con valores entre 164 y 3461 ng/µL obtenido por el Fenol– Cloroformo – Alcohol isoamilico. Asimismo, se estandarizó un protocolo de PCR para evaluar la eficiencia del ADN obtenido, logrando una amplificación de 1,325 bp para la región control del ADNmt de Pecari tajacu a partir de una secuencia heteróloga propuesta para Sus scrofa (cerdo doméstico). Finalmente, se demostró que el protocolo aplicado para extraer el ADN fue eficiente y se constituye en una herramienta para el conocimiento del estado genético de la especie y el comercio ilegal del recurso.

The Forestry and Wildlife Law in Peru, allows subsistence hunting of wildlife for feeding and fur trade by local communities. These skins are dried by “sweet dry” process and then stored in villagers’s homes until trade. Skins are hughly manipulated and exposed to harsh environmental conditions. In this study 300 skin samples were collected from three river basins (Amazon, Napo and Pacaya-Samiria) and a DNA extraction protocol for Pecari skins was standardized and two methods of DNA extraction (phenlo-chloroform - isamyl alcohol and column) were evaluated. The quantification of DNA was possible, obtaining values between 164 and 3461 ng/µL obtained by phenol-chloroform - isoamyl alcohol. Also, a PCR protocol was standardized to evaluate the efficiency of obtained DNA, achieving an amplification of 1,325 bp for the Pecari tajacu mtDNA control region from a heterologous sequence proposed for Sus scrofa (domestic pig). Finally, it was shown that the protocol applied to extract DNA was efficient and constitutes a tool for understanding the genetic status of the species and illegal trade resource.